Полиакриламидті гельдік электрофорез кезіндегі сақтық шаралары

· полиакриламидгельді акриламидті мономерден, полимерлеудің бастапқы материалынан, катализатордан және тұз бен буфер қоспасынан біріктіру керек.

· акриламиджәне BIS (N, N '- метилен қос акриламид) мономер түріндегі гель матрицасы болып табылады.

· аммоний персульфаты адгезивті полимерлеу процесін бастайды. Желімді дайындау үшін суда дайындалған аммоний персульфатының 10% ерітіндісі қажет. Ақпараттың көпшілігі белсенді пайдалану қажеттілігін көрсетті. Дегенмен, 10% ерітіндіні белсенділікті айтарлықтай жоғалтпай, бірнеше апта бойы 4℃ температураға қоюға болады. 10 мл-ге дейін құйыңыз және желім біріктірілмей қалғанда тастаңыз.

Кеңес: пайызыакриламиджелім мен протеин желімін реттілікте бірдей емес. Алдын ала дайындалған акриламид: BIS ерітіндісін пайдалансаңыз, дұрыс бөтелкені алыңыз.

· TEMED (N, N, N ', N '- тетраметил этилендиамин) - катализатор, қоңыр бөтелкеде, тоңазытқышқа орналастырылған. Желімді құю алдында ғана қосыңыз.

· Электрофорезде қолданылатын полиакриламидті электрофорез шынысын әр жолы алдында және кейін жуу керек. Электрофорезден кейін жұмсақ щеткамен және шүберекпен ыстық сабынды суда жуыңыз, тазартылған сумен шайыңыз және кептіріңіз.

· Ылғал мен шаң қуыс полимерді тудыруы мүмкін. Электрофорез алдында шыны пластинаны шыны тазалағышпен тазалап, жұмсақ щеткамен сүртіңіз. Дистилденген сумен жуып, қағаз майлықпен мұқият құрғатыңыз. Қағазбен сүртпес бұрын 70% этанолмен шаю тазалауға және кептіруді тездетуге көмектеседі. Акриламид үлгілерін дәйекті түрде қосыңыз: BIS, су, буферлік ерітінді, аммоний персульфаты, TEMED. Жақсылап шайқаңыз және дереу құйыңыз.

Полимеризация алдында полиакриламидті газсыздандыру қажет емес. (Акриламид бұрын көпіршіктерді кетіру үшін вакуумға орналастырылған, өйткені оттегі полимерленуді тежейді.)

Көлденең желім нүктесі үлгісінің кеңестері.

· төменгі қорапқа қара қағаздың бір бөлігін салыңыз, нақтырақ көру үшін үлгі тесіктерін жасаңыз.
· коллоидтың дәл үстіндегі желім цистернасы толтырылған буфер.
· шетінде жарық болса, шамдарды қосыңыз, жарық коллоидты жарқыратсын. Үлгіні тамшуырға салыңыз.
· автоматты тамшуыр құрылғысын қолдану.
· 10-200 м 1 сұйықтықтың жылжымалы нүктесі үлгідегі нүктелердің көпшілігінде қолданылуы мүмкін. Өте кішкентай үлгі саңылаулары үшін (10μ1-ден аз) желімді ретке келтіру үшін пайдаланылатын ұзын тамшуыр басы ыңғайлы.

· баяу қозғалатын сұйықтықты ингаляциялай отырып, үлгіге батырылған тамшуыр. Үлгі глицеринмен жабысқақ болып көрінуі мүмкін және жылдам айдау тамшуыр басына ауа көпіршіктерін тартуы мүмкін.

· Тамшуыр басын ингаляциялаудан кейін үлгілер сұйықтық басын түтіктің шетінде ақырын жылжытады немесе сүрту қағазы сұйықтық басын тамшылардың сыртына сорады. Үлгіні сорып алмау үшін абай болыңыз.

Үлгіні үлгі тесігіне салыңыз

· аздап қысымды ұстап тұру үшін тамшуыр құрылғысы, сынамаларды толып жатқан сұйықтықтың басын аздап жылжытыңыз.
· буферге енгізілген тамшуыр басы нүктелік тесіктерден сәл жоғары, оң қысымды ұстаңыз. Тамшуырдың ұшын кішкене тесікке салуға болады.
· үлгілерді баяу және тұрақты түрде шығару. Тамшуыр ұшы сынаманың нүктелік тесігінің үстіне қойылады және үлгі тесікке батады. Үлгіні итерудің орнына үлгі саңылауын толтыру үшін шөгуге рұқсат етіңіз.
· сұйық басы бар үлгінің соңғы тамшысы бір рет сұйықтық екінші аяққа жылжиды, сұйықтықты баяу көтереді, буферден шығады

Тік желім сынамасын қалай жасауға болады?

· екі шыны кесек арасында қалыптасқан тік желім нүктесі үлгі тесіктері. Өте жұқа желімде тамшуыр басын екі шыны пластинаның арасына салу мүмкін емес. Глицеринге назар аударыңыз! Тамшуыр басын үлгі тесігінің үстіне қойыңыз, сонда үлгі тесікке батады.
· нүкте үлгісін бұрын, полипропилен ацил гель үлгісі тесігі таза шаю үшін тік нүктесін қоюды ұмытпаңыз. Полимерленбеген акриламидті және үлгі тесігінің түбінде пайда болуы мүмкін суды жуыңыз. Су үлгі саңылауды айтарлықтай кішірейте алады. 25 мл немесе 50 мл шприц пен 18 калибрлі инені пайдаланыңыз. Электрофорез буферін құйып, үлгі саңылауды абайлап шайыңыз.
· үлгідегі тесікті көру қиын болуы мүмкін, бірақ сонымен бірге қалғаны оңай. Артық тесіктер болса, үлгі буферін бромофенол көкпен сынауға болады.